胚如何培养?
对种胚进行人工离体培养的技术。一般用种子繁殖的植物,种胚发育良好。长期无性繁殖的植物,尤其是一些早熟种的胚,在母体组织内不能正常发育,或胚生理成熟速度慢于果实成熟速度。此外在柑橘的有性胚及植物远缘杂交时,也会发生胚在母体内死亡的现象,对这些植物就可利用胚培养技术获得不育胚的植株。
植物的胚培养是组织培养的一个方面。早在20世纪初有人用它作为育种的一种手段。很早报道的有海宁(E.Hannig,1904)用十字花科的莱菔属(Raphanus cochlearia)和西洋山嵛菜属植物为材料试验胚培养获得成功,其后,图基(Tukey,1933~1934)又用李属种子进行胚培养。李继侗(1934)在中国很早开展这项研究工作。他发现银杏胚乳的提取物能促进银杏离体胚的生长。从40年代起,胚培养技术已广泛应用于果树育种并取得进展。
至今,用于胚培养基的配方种类虽然很多,但主要有水、无机盐类,有机物质和凝固物体这4类物质组成。无机盐类主要有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁以及必要的微量元素。有机物质通常是蔗糖;凝固物为优质琼脂。若培养的胚极为幼小,胚长度/种子长度(PFI)值在0.4以下,还需要添加某些氨基酸和激动素,蔗糖浓度也要适当提高。落叶果树的种胚,接种后需低温处理,否则发芽后枝叶形成莲座状不能成苗。挑胚接种后在2~4℃条件下需经60~80天冷藏。如种胚发育时间短,则需要低温时间相对延长,通过休眠长成的试管苗,在15~25℃条件培育,待长至4~6片真叶时,并有发达根系时即可移出。试管苗移栽入土时的栽培技术,常常是胚培养成败的关键,为使移植成功,必须加强光照,培养壮苗,且每天保持8~10℃温差,并保持适当温度。约经10天左右,待新叶长出,表明幼苗根系开始恢复生长。柑橘为多胚性植物,一粒种子含有多个胚,但其中只有一个有性胚,其余均为无性胚。有性胚发育弱,在完熟期大多败育。无性胚严重地干扰了柑橘的杂交育种工作。胚培技术有助于克服这一困难,进行种胚分离培养,可提高有性胚的出苗率。不少果树种子出苗极为困难,须经长时间层积或其它处理。应用胚培养技术,经过种胚苗的增殖培养、生根培养等步骤,可以获得苹果、山楂、猕猴桃等落叶果树大量种胚苗植株,提供了砧木苗的新途径。
如何制作植物(试管苗)培养基
常用25种培养基一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用) 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 7.0—7.2 1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。 二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基,培养放线菌用) 可溶性淀粉 20g KNO3 1g NaCl 0.5g K2 HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 20g 水 1000ml pH 7.2—7.4 配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,在火上加热,边搅拌边加水及其他成分,溶化后,补足水分至1000ml。1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。 三、查氏培养基(培养霉菌用,实验16) NaNO3 2g K2 HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 蔗糖 30g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。 四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用) 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2 PO4 1g MgSO4 ·7H2 O 0.5g 1/3000孟加拉红(rose bengal,玫瑰红水溶液) 100ml 琼脂 15—20g pH 自然 蒸馏水 800ml 0.56kg/cm2 (8磅/英寸2 ),112.6℃灭菌30分钟。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。 五、马铃薯培养基 (实验16) 马铃薯 200g 蔗糖(或葡萄糖) 20g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,溶化后补足水至1000ml。1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。
植物组织培养中,试管苗生根的措施有哪些
组培试管苗生根分为传统的瓶内生根和瓶外生根,瓶内生根就是将无根苗转接到生根培养基中进行促根;瓶外生根分为基质培、气雾培、水培,目前基质培是相对较成熟的,也就是微体扦插法,即把经过生长素处理的裸根试管苗扦插到基质中,随后移入育苗大棚,并提供生根生长所需的光、温、水、肥、气等条件来完成生根的过程。它可以把传统的组培生根阶段与炼苗一起进行,从而降低成本,提供苗的质量
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